PURIFICAÇÃO E CARACTERIZAÇÃO DE SUBTIPOS SLOW-MOVING E FAST-MOVING DE IMUNOGLOBULINA G A PARTIR DE SORO DE COELHO

Resumo

A imunoglobulina G é a principal classe de anticorpos constituintes dos fluidos sanguíneos animais, tem massa de 150kDa e representa uma das estruturas mais importantes no sistema de defesa. Estas moléculas são largamente utilizadas em aplicações terapêuticas, imunodiagnósticos e purificação de outros anticorpos e antígenos em processos biomédicos, já que a purificação de proteínas limita os riscos de efeitos colaterais nos seres inoculados. Neste trabalho, imunoglobulinas G provenientes de soro de coelho foram obtidas por precipitação com sulfato de amônio saturado. A massa de IgG obtida correspondeu à cerca de 72,5% de todas as classes de imunoglobulinas presentes no soro. Em seguida, a IgG pura foi submetida à cromatografia de troca iônica em coluna de DEAE-Sepharose, processo que segregou os subtipos slow-moving (durante a eluição com tampão fosfato pH6,3) e fast-moving (fração eluída com tampão fosfato pH8,0). A caracterização da imunoglobulina G pura foi dada por eletroforese em gel SDS-PAGE 10%, onde a amostra não reduzida revelou banda única de peso molecular igual a 150kDa e a amostra reduzida com 2-mercapto-etanol revelou banda de 50kDa referente à cadeia pesada e 25kDa das cadeias leves.

Abstract

Immunoglobulin G is the main class of antibodies of the animal blood components, its mass is equal to 150kDa and it represents one of the most important structures of defense system. These molecules are widely applied in therapeutic uses, immunodiagnostics and in other antibodies and antigens purification, since proteins purification limits risks of collateral effects in inoculated bodies. In this work, immunoglobulins G from rabbit serum were obtained by precipitation with saturated ammonium sulfate. The IgG's mass obtained corresponded to about 72,5% of all the immunoglobulins' classes of the serum. After, the pure IgG was submitted to a ion-exchange chromatography in a DEAE-Sepharose column, which segregates the slow-moving piece (during the phosphate buffer pH6,3 elution) and fast-moving piece (fraction eluted with phosphate buffer pH8,0). The characterization of the pure immunoglobulin G was carried out by a 10% SDS-PAGE electrophoresis, where the non-reduced sample showed a single band with molecular weight of 150kDa and the sample that was reduced with 2-mercaptoethanol revealed bands with 50kDa related to the heavy chains and 25kDa of the light chains.